anna witkowska neurolog dziecięcy siedlce

Po aktywacji komórek Th9, w których pośredniczy CD3 ., indukowano ponad 100 genów ponad 5-krotnie, 252 geny indukowano ponad 10-krotnie, a 361 genów zmniejszono ponad 10-krotnie (Suplementowa Figura 1B). Wśród genów wykazujących największą indukcję były cytokiny i chemokiny, w tym Il2, Il3, Il21, Areg, Xcl1, Ccl3, Ccl4, Ccl22 i Il9 (Suplementowa Figura 1, B i C). Po ustaleniu transkryptomu wyrażanego w komórkach Th9 na wyższych poziomach niż w komórkach Th2 lub Treg, wybraliśmy panel genów w oparciu o ich potencjalny związek z funkcją Th9 i potwierdziliśmy ekspresję specyficzną dla Th9 w większym panelu Th podzbiorów. Spośród zbadanych genów, Ccr8, Crem i Tnfsf13b wykazały największą ekspresję w komórkach Th9 i znalazły się wśród genów wykazujących wspólną ekspresję z komórkami Th2 (Figura 2A). Zawarliśmy analizę Ccr4 w tym podzbiorze, genie receptora chemokin, który miał największą ekspresję zarówno w komórkach Th9, jak i Th2. Ekspresja Batf, Cxcl3, Ahrr i Maf była największa w komórkach Th9, ale miała również selektywną ekspresję w komórkach Th2 i Th17 (Figura 2A). Fasl i Furin wykazały wspólną ekspresję w komórkach Th9 i Th1 (Figura 2A i dane nie pokazane). Itgae wykazała wspólną ekspresję w komórkach Th9 i iTreg (Figura 2A). Co ważne, kilka genów, w tym Il17rb, Il1rn, Erg i Ahr, wykazuje selektywną ekspresję w komórkach Th9 (Figura 2A). Figura 2 Ekspresja i funkcja sygnatury genu Th9. Naiwne limfocyty T CD4 różnicowano w warunkach polaryzacji w celu wytworzenia wskazanych podzbiorów Th. (A) RNA wyizolowano z podzbioru Th w celu analizy ekspresji wskazanych genów za pomocą qRT-PCR. Ekspresja jest względna w stosunku do naiwnych komórek T CD4 + i znormalizowana do ekspresji. -2 mikroglobuliny. (B) Analiza cytometrii przepływowej ekspresji CD103 na powierzchni podzbiorów Th. Liczby wskazują średni procent. SD komórek pozytywnych z co najmniej trzech eksperymentów. (C) Analiza cytometryczna przepływu ekspresji CCR4 na powierzchni Th podzbiorów. Liczby wskazują średni procent. SD komórek pozytywnych z co najmniej trzech eksperymentów. (D) Test chemotaksji odpowiedzi komórek Th2 i Th9 na wzrastające stężenia CCL22. Migrujące komórki po 4 godzinach inkubacji policzono w hemacytometrze. Wyniki wskazują na średnią. SD trzykrotnych oznaczeń i są reprezentatywne dla trzech eksperymentów. (E) Stężenie IL-1RA określono w supernatancie 24 godziny po stymulacji anty-CD3 wskazanych podzbiorów Th. Wyniki są średnie. SD z trzech eksperymentów. (F) Naiwne komórki T CD4 + hodowano w warunkach polaryzacji Th9 pod nieobecność (DMSO, nośnik) lub obecność FICZ we wskazanym stężeniu. Stężenie IL-9 określono 24 godziny po stymulacji anty-CD3. * P <0,05. Następnie zbadaliśmy, czy zróżnicowana ekspresja tych genów powoduje różnice w ekspresji białka i / lub funkcji wśród podgrup. Użyliśmy cytometrii przepływowej do wykrycia integryny (CD103) na wyższym procencie komórek Th9 niż Treg i stwierdziliśmy CCR4 na wyższym odsetku komórek Th9 niż na komórkach Th2 (Figura 2, B i C). Ponadto, w eksperymencie Transwell, komórki Th9 migrowały bardziej wydajnie w kierunku zwiększenia stężeń CCL22, ligandu dla CCR4 i CCR8 niż komórki Th2 (Figura 2D). Supernatanty z komórek Th9 miały największe stężenia IL-1RA, kodowane przez Il1rn, które wykryto przy użyciu testu ELISA (Figura 2E). Dodanie liganda AHR FICZ do hodowli różnicowania zwiększyło produkcję IL-9 z komórek Th9, ale nie z innych podzbiorów komórek Th (Figura 2F i dane nie pokazane). Tak więc, komórki Th9 mają rozpoznawalną sygnaturę transkrypcyjną, która daje unikalne właściwości funkcjonalne. BATF jest częścią sieci transkrypcyjnej Th9 [podobne: katalog oriflame 17 2014, katalog oriflame 3 2015, oriflame katalog 16 2014 ]