apteki ostrów

Stężenie komórek w fazie z wybuchem pozakomórkowym zmierzono, a liczbę i częstotliwość potencjałów czynnościowych na impuls (AP / impuls) określono ilościowo. W warunkach kontrolnych potencjał spoczynkowy był identyczny u myszy kontrolnych i myszy z KO; jednakże depolaryzacja w fazie z pęknięciem sieci była znacznie zmniejszona u myszy KO (5,51 . 0,59 mV, n = 7) w porównaniu z kontrolami (10,13. 1,30 mV, n = 5, p <0,01, Figura 4, G. I) . Częstotliwość AP / burst i strzelania myszy KO była znacząco niższa niż u myszy z miotu kontrolnego (Figura 4, B i D). Po przejściu z warunków kontrolnych do hipoksycznych zmiany w potencjale spoczynkowym u myszy kontrolnych i myszy KO były podobne. Jednakże, myszy KO miały poważne obniżenie depolaryzacji podstawowej, gdy były eksponowane przez niedotlenienie (od 5,51. 0,59 do 0,52. 1,36 mV; n = 7, P <0,01), podczas gdy myszy kontrolne nie wykazywały znaczącej redukcji (10,13. 1,30 do. 6,09. 6,43 mV, Figura 4, G. I). AP / seria myszy KO drastycznie spadła, a 2 z 7 plastrów przestało sapać po ponad 5 minutach niedotlenienia, podczas gdy w plastrach kontrolnych zaobserwowano względnie niewielką redukcję AP / serii i wszystkie plasterki kontrolne utrzymywane oddychanie (Ryc. 4, C i E). Interesujące jest to, że brak sapania obserwowany w plastrach KO w warunkach niedotlenienia został przywrócony po zastosowaniu w wannie tolbutamidu, inhibitora kanału potasowego wrażliwego na ATP (KATP) (Supplemental Figure 1), co sugeruje wewnętrzny deficyt w fizjologii neuronów preBötC, który może przyczyniają się do zmian w oddychaniu myszy KO. Chociaż upośledzenie oddychania jest jednym z objawów klinicznych myszy z KO, aktywacja mikrogleju była rzadko obserwowana w każdym z klasycznych ośrodków oddechowych, takich jak przyśrodkowe jądro półprzedsionkowe, jądro przewodu pokarmowego lub preBötC. Jednak u myszy z późnym stadium myszy KO obserwowano aktywację mikrogleju wokół ciał komórek serotoninergicznych w obrębie rdzeniastego szwu (raphe pallidus i obscurus), regionu mózgu istotnego dla kontroli oddechowej (30). W niektórych przypadkach aktywacja mikrogleju rozszerzyła się na ich projekcje, czemu towarzyszyło łagodne mikroglejowanie w preBötC, które zidentyfikowano na podstawie immunolabelingu receptora neurokininy (Suplementowa Figura 2, A. D), co sugeruje, że zmiany w tych neuronach nie były wystarczające do wywołania ostrego wtórna reakcja zapalna. Nie wykryto zmian zwyrodnieniowych w immunoreaktywnych neuronach receptora Phox2B jądra retrotrapezoidalnego (31, 32). Selektywna dezaktywacja Ndusf4 w VN indukuje neurodegenerację i nieprawidłowości w oddychaniu oraz zwiększa śmiertelność. PreBötC jest niezbędny do oddychania in vivo (25), a na jego wpływ ma duża liczba wejść neuronowych, w tym te z VN (patrz dyskusja). Ponieważ VN jest znaczącym miejscem glejozy i neurodegeneracji u myszy KO, selektywnie inaktywowaliśmy gen Ndufs4 tylko w tym jądrze poprzez obustronne wstrzykiwanie dorosłym myszom Ndufs4lox / lox z towarzyszącym adenowcom wirusom (typ 1) eksprymującym Cre-GFP (AAV1-Cre-GFP ) do generowania myszy AAV-VNaKO. Jako kontrolę, myszom Ndufs4lox / lox wstrzyknięto AAV1 kodujący niefunkcjonalny Cre (AAV1-Crea-GFP) w celu wytworzenia myszy AAV-VNyCK. Rozległą ekspresję GFP obserwowano w VN po obustronnej transdukcji wirusowej (Figura 5A). Ponadto, myszy AAV-VNOCO rozwinęły rozległą aktywację mikrogleju miesiąc po zabiegu, ocenianą przez barwienie znacznika Iba1 (Figura 5A). Barwienie Iba1 było zależne od utraty ekspresji Ndufs4, ponieważ nie zaobserwowano znaczącej aktywacji mikrogleju w VN myszy AAV-VNyC (Figura 5A). Figura 5 Zmiany histopatologiczne i behawioralne po inaktywacji Ndufs4 w VN. (A) (lewy panel) Reprezentatywny obraz stopnia transdukcji (komórki GFP-dodatnie) po dostarczeniu wektora do VN [patrz też: rak tarczycy objawy, rak pluc objawy, reumatoidalne zapalenie stawów leczenie ]