Całkowita remisja po leczeniu ostrej białaczki promielocytowej za pomocą trójtlenku arsenu ad 6

Analiza hybrydyzacji fluorescencji in situ
Badanie hybrydyzacji fluorescencji in situ komórek APL. Pomarańczowy sygnał znajduje się na długim (q) ramieniu chromosomu 15, pokrywającym locus genu PML, a zielony sygnał znajduje się na q ramieniu chromosomu 17, pokrywając locus genu RAR-.. Panel A pokazuje wynik fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ kontroli pozytywnej z cechą translokacji (15; 17) APL, która tworzy produkt genu PML-RAR-., co daje hybrydowy sygnał fluorescencji żółtej. Panel B pokazuje fluorescencyjną hybrydyzację in situ komórek od pacjenta z APL, które zostały posortowane do równoczesnej koekspresji CD11b i CD33, która wykazuje utrzymywanie się genu fuzyjnego. Panel C pokazuje wynik fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ dla populacji komórek od tego samego pacjenta, później w remisji, która nie przenosi już translokowanego DNA.
Jednojądrzaste komórki szpiku kostnego pobrane od pacjenta podczas zarówno wczesnej, jak i późniejszej fazy pełnej remisji, sortowano za pomocą cytometrii przepływowej w celu pomiaru koekspresji CD33 i CDllb. Zastosowaliśmy fluorescencyjną analizę hybrydyzacji in situ w celu zbadania komórek we wczesnej fazie remisji. W sposób podobny do kontroli kontrolnych komórek APL (Figura 2A), większość tych komórek dawała sygnał hybrydowy, co wskazuje na translokację pomiędzy genami PML i RAR-a (Figura 2B) i ich pochodzeniem z klonu nowotworowego. Jednakże, gdy komórki od tego samego pacjenta zostały posortowane według tych samych zmiennych później w remisji, wykryto tylko normalny wzór sygnałów fluorescencyjnych (Figura 2C), co wskazuje, że te komórki pochodzą od normalnych hematopoetycznych komórek progenitorowych.
Analiza Western Blot
Figura 3. Figura 3. Analiza Western błot białka ekstrahowanego z komórek jednojądrzastych szpiku kostnego otrzymanego w znacznym stopniu od pacjenta potraktowanego trójtlenek arsenu. Trójtlenek arsenu zwiększył ekspresję form prekursorowych kaspazy 2 i kaspazy 3, razem z aktywowanymi (odszczepionymi) formami kaspazy 1. Kontrolę ilości białka obciążonego, barwionego Ponceau-S, pokazano na dole.
Ekstrakty białkowe pobrane z jednojądrzastych komórek szpiku były seryjnie badane za pomocą analizy Western blot. Jak pokazano na Figurze 3, postacie prekursorowe kaspazy 2 i kaspazy 3 były regulowane w górę u jednego pacjenta w odpowiedzi na traktowanie trójtlenkiem arsenu. Co więcej, leczenie to również indukowało ekspresję ciętych fragmentów kaspazy 1, co wskazuje na aktywację enzymu. Dodatkowe dane wskazują również na zwiększoną ekspresję rozszczepionej postaci kaspazy 3 (dane nie przedstawione). (Przeciwciało użyte w tych eksperymentach nie reaguje z odszczepioną postacią kaspazy 2.)
Dyskusja
W tym badaniu potwierdziliśmy wstępne doniesienia o uderzającej aktywności trójtlenku arsenu przeciwko APL, początkowo odnotowanego przez badaczy z Harbin12,13 i Szanghaju, 14 Chin. Z kilkoma wyjątkami, pacjenci w naszym badaniu mieli wielokrotne nawroty i mieli chorobę, która była oporna na konwencjonalną chemioterapię, retinoidy lub przeszczep szpiku kostnego. W momencie rozpoczęcia badania pacjenci mieli liczne powikłania związane z nawrotową białaczką, w tym niewydolnością oddechową, rozsianą infekcją ospy wietrznej-półpaśca, aspergilozą kawitacyjną, przewlekłą niewydolnością nerek i chorobą przeszczep przeciwko gospodarzowi.
[więcej w: nutrend, dekstrometorfan, atropina ]
[podobne: rak pluc objawy, rak szyjki macicy leczenie, rak tarczycy objawy ]