dromader tczew

Wytwarzanie IL-9 w komórkach Th9 zależy od czynników transkrypcyjnych, w tym PU.1, STAT6 i IRF4 (2. 4, 7, 9). IL-10 i IL-21, które są również wytwarzane przez komórki Th9 (2, 19), są wyrażane niezależnie od PU.1 (9, 11), ale opierają się na STAT6 i IRF4 (Figura 3A). Figura 3 Regulacja czynnika transkrypcyjnego genów związanych z Th9. Naiwne limfocyty T CD4 + od myszy wskazanych genotypów różnicowano w warunkach Th9. (A) Supernatanty izolowano po stymulacji anty-CD3 przez 24 godziny, a stężenie cytokin oznaczano za pomocą testu ELISA. ND, nie wykryto. (B) RNA wyizolowano z komórek Th9 każdego genotypu w celu analizy ekspresji wskazanych genów za pomocą qRT-PCR. Ekspresja jest związana z komórkami Th9 typu dzikiego. Dane są średnie. SD z trzech do sześciu eksperymentów. (C. E) Naiwne limfocyty T CD4 + izolowano z myszy typu dzikiego i pozbawionych BATF i różnicowano w warunkach polaryzacji Th9 przed analizą wytwarzania IL-9 z zastosowaniem wewnątrzkomórkowego barwienia cytokiną (C), ELISA po 24-godzinnej stymulacji anty-komórkami. CD3 (D) i qRT-PCR mRNA po 6 godzinach stymulacji anty-CD3 (E). (F i G) Naiwne limfocyty T CD4 + z myszy transgenicznych typu dzikiego i Batf zostały zróżnicowane w warunkach polaryzacji Th9 przed analizą wytwarzania IL-9 z zastosowaniem wewnątrzkomórkowego barwienia cytokiną (F) i ELISA po 24-godzinnej stymulacji anty-CD3 (G ). (H) RNA wyizolowano z komórek Th9 typu dzikiego i pozbawionych BATF do analizy ekspresji wskazanych genów za pomocą qRT-PCR. (I) Supernatanty izolowano po stymulacji anty-CD3 przez 24 godziny i testowano na stężenie cytokin metodą ELISA. Dla wszystkich danych, * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,0001. (J) Schemat podsumowujący regulację czynnika transkrypcyjnego genów w komórkach Th9. Geny regulowane przez każdy czynnik transkrypcyjny znajdują się w każdej skrzynce kodowanej kolorem do czynnika transkrypcyjnego. §Negegratywnie regulowany przez IRF4; §Niniejszym regulowanym przez IRF4 i STAT6. Po ustaleniu dodatkowego panelu genów demonstrujących preferencyjną ekspresję w komórkach Th9, chcieliśmy ustalić, czy istnieją wspólne wymagania dla indukujących Th9 czynników transkrypcyjnych w ekspresji tych genów. Zgodnie z IRF4 znajdującym się poniżej STAT6 (3), było wspólne zapotrzebowanie na oba czynniki w ekspresji Ahr, Crem, Ccr4 i Cxcl3, a oba czynniki miały negatywny wpływ na ekspresję Itgae i Tbx21, przy czym ten ostatni był transkrypcją czynnik, który negatywnie reguluje produkcję IL-9 (Figura 3B). Wyrażenie Batf, Gata3 i Ccr8 było zależne od STAT6, ale nie od IRF4 (Figura 3B). Przeciwnie, STAT6 był wymagany dla Il1rn, Erg, Il17rb i Tnfsf13b, a IRF4 miał bardziej skromny lub negatywny wpływ na ekspresję tych genów (Figura 3B). PU.1 był wymagany do ekspresji mniejszego podzbioru genów, w tym Il17rb, Itgae, Tbx21 i Batf, miał niewielki negatywny wpływ na ekspresję Ahr i Crem i nie miał wpływu na ekspresję innych genów Th9 (rysunek 3B). Preferencyjna ekspresja BATF w komórkach Th9, w połączeniu z wymaganiem dla IRF4 w ekspresji genu Th9 (nr 7 i Figura 3B), oraz ostatnie doniesienia demonstrujące wspólnie funkcję IRF4 i BATF w rozwoju komórek Th17 (16. 18) sugerują, że BATF może przyczynić się do generacji Th9. Aby to przetestować, zróżnicowaliśmy naiwne limfocyty T CD4 + od myszy typu dzikiego i z niedoborem BATF (Batfc Z / y Z) w warunkach hodowli Th9. Zaobserwowaliśmy znaczący spadek produkcji IL-9 w hodowlach Th9 z niedoborem BATF, co oceniono za pomocą wewnątrzkomórkowego barwienia cytokin i ELISA (Figura 3, C i D). Podobnie zaobserwowaliśmy zmniejszenie mRNA Il9 w hodowlach Th9 pozbawionych BATF (Figura 3E). Co ważne, w przypadku braku BATF, komórki Th9 nie różnicowały się w inne podzbiory komórek Th, ponieważ nie było zmian w produkcji IFN-a, IL-4 i IL-17 lub w ekspresji FOXP3 (dane nie pokazane) [więcej w: rak kolczystokomórkowy, katalog oriflame 17 2014, polipektomia ]