kabina na podczerwień

Nie było dowodów na krótsze aksony lub nieprawidłowe morfologie aksonów w neuronach izolowanych z Reep1. /. myszy (Figura 2, H i I, i dodatkowa Figura 3). Opierając się na dorosłym fenotypie, jego postępowym i degeneracyjnym charakterze, a nie na rozwoju, oraz ograniczeniu defektu do aksonów górnych neuronów ruchowych, wnioskujemy, że mysz z niedoborem REEP1 jest ważnym modelem do badania patofizjologii za utratą aksonów w SPG31. Ekspresja Reep1 jest specyficzna dla neuronów i szczególnie widoczna w wyższych neuronach ruchowych. Radioaktywna hybrydyzacja in situ na pełnej powierzchni na strzałkowych sekcjach myszy wykazała, że transkrypty Reep1 są już eksprymowane podczas rozwoju embrionalnego i są ograniczone do układu nerwowego (Figura 3A i Suplementowa Figura 4). Figura 3 Ekspresja reep1 jest specyficzna dla neuronów i szczególnie silna w korowych górnych neuronach ruchowych. (A) Autoradiografia hybrydyzacji in situ mezjalnej sekcji zarodkowej E18,5 z użyciem sondy specyficznej dla Reep1. ca, ogonowe; cr, czaszkowy; d, grzbietowa; v, brzuszny. Pasek skali: 3 mm. (B) Analiza Western blot lizatów kilku narządów od 4-miesięcznych myszy typu dzikiego pokazuje ekspresję REEP1 w mózgu. Lizaty z pierwotnych kultur kory (P1) ujawniają ekspresję w neuronach, ale nie w komórkach glejowych. (C) Schemat części czołowej dorosłego mysiego mózgu o wartości bregma +0,7 mm. cc, ciało modzelowate; cx, kora; LV, komora boczna. Box przedstawia obszar wyświetlany w D i E. (D) Nissl barwienie części 4-miesięcznej myszy typu dzikiego. pma, główny obszar motoryczny; sma, dodatkowy obszar motoryczny. Groty strzałek pokazują granice obszaru. Skalowane pręty: 500 .m. (E) Hybrydyzacja in situ z sondą specyficzną dla Reep1 na odcinku sąsiadującym z sekcją pokazaną w D. Pasek skali: 500 .m. (F) Powiększenie głównego obszaru silnika. Zwróć uwagę na szczególnie silne znakowanie komórek w warstwie V pierwotnej kory ruchowej (tj. Górnych neuronów ruchowych). Pasek skali: 200 .m. Zgodnie z tymi ustaleniami, białko REEP1 wykryto w lizatach mózgu, ale nie w lizatach żadnej z kilku innych analizowanych tkanek (Figura 3B, lewy panel). Co więcej, sygnał pochodzący od REEP1 był obecny w lizatach mieszanych neuronalnych hodowli komórek glejowych, ale był nieobecny w lizatach czystych hodowli komórek glejowych (Figura 3B, prawy panel), wskazując, że REEP1 jest specyficzny dla neuronów. Ponieważ nasze przeciwciało nie wykryło endogennego REEP1 w badaniach immunofluorescencji, przeprowadziliśmy nieradioaktywne hybrydyzacje in situ w celu zdefiniowania ekspresji Reep1 w mózgu na poziomie komórkowym. Szczególnie silne znakowanie komórek w warstwie V pierwotnej kory ruchowej w przekrojach mózgu wieńcowego sugeruje dominującą ekspresję Reep1 w wyższych neuronach ruchowych (Figura 3, C. F). Fenotyp i patologia wyrzucenia REEP1, jak zdefiniowano powyżej, są zatem zgodne zarówno z tkanką jak i komórkową specyficznością ekspresji Reep1. REEP1 łączy się z błonami komórkowymi i jest wzbogacony w ER. REEP1 zawiera dwie domeny hydrofobowe, które zostały zaproponowane do pośredniczenia w powiązaniu z błoną (23). Jego wewnątrzkomórkowa lokalizacja jest jednak kontrowersyjna. Raporty zawierają błonę plazmatyczną (23), mitochondria (8) lub ER (11) lokalizację REEP1. W lizatach białkowych wytworzonych z mózgu myszy, wykryliśmy REEP1 wyłącznie w surowej frakcji błonowej, ale nie w frakcjach cytozolowych lub mitochondrialnych (Figura 4A). W podfrakcjach frakcji po-mitochondrialnej detekcja REEP1 zachodziła na rurkowy marker ER retikulonu 4 (RTN4) (16), a nie z markerem a-synaptycy trans-Golgi (odnośnik 24 i Figura 4, B i C). Figura 4IAP1 jest wzbogacony w błony komórkowe, które zawierają białko ER RTN4. (A) Immunoblot z subkomórkowych frakcji mysich lizatów mózgu
[więcej w: katalog oriflame 2015, reumatoidalne zapalenie stawów leczenie, rezonans magnetyczny kraków cena ]