nerwica natręctw książki

Co ważne, unieśmiertelnione transgeny znajdowały się pod kontrolą promotora szczurzej insuliny 2. Zatem człowiek. komórki, które rozwinęły się w myszach SCID podczas różnicowania tkanki, eksprymowały transgenów prowadzących do rozwoju insulinoma, które były dalej zamplifikowane w hodowli, aby wytworzyć linie komórkowe, takie jak EndoC-H1 (10). Komórki EndoC-AH1 ulegają ekspresji insuliny i są liczne. specyficzne dla komórki markery i wydzielana insulina po stymulacji glukozą i pobudzeniem wydzielania. Łącznie, fenotyp i funkcja komórek EndoC-AH1 są zbliżone do pierwotnego dorosłego człowieka. komórki z jedną zasadniczą różnicą. Rzeczywiście, jak opisano powyżej, człowiek dorosły. komórki rozmnażają się wyjątkowo słabo, podczas gdy komórki EndoC-AH1 nieustannie się rozszerzają. Tutaj wygenerowaliśmy człowieka. linia komórkowa, EndoC-P H2, przez ukierunkowaną onkogenezę z wektorami lentiwirusowymi eksprymującymi podlegające SV40 LT i hTERT. Po wycięciu nieśmiertelnych transgenów gwałtownie zmniejszyła się proliferacja komórek, czemu towarzyszyło znaczące wzmocnienie. cechy specyficzne dla komórki, takie jak zwiększona ekspresja i zawartość genów insuliny. Taka linia komórkowa stanowi duży krok naprzód w kierunku rozwoju autentycznego człowieka. komórki. Stanowi także unikalne narzędzie do badania ludzi. proliferacja komórek. Wyniki Generowanie człowieka. linia komórkowa z doskonałymi unieśmiertelniającymi transgenami. Wcześniej stworzyliśmy człowieka. linia komórkowa, EndoC-AH1, przez ukierunkowaną onkogenezę mediowaną przez lentiwirusową integrację 2 unieśmiertelniających transgenów, SV40 LT i hTERT w ludzkiej płodowej trzustce (10). W tym przypadku celowaliśmy w generowanie warunkowo unieśmiertelnionych. linie komórkowe, w których można wyciąć unieśmiertelniające transgenów. W tym celu wektory lentiwirusowe zmodyfikowano przez wstawienie miejsca loxP w skróconym regionie U3 (Delta U3) z 3. LTR. W takiej konfiguracji, po integracji w genomie transdukowanych komórek, region LOXP delta U3 jest duplikowany i dwa miejsca loxP flankują zintegrowane sekwencje, pozwalając na późniejsze wycięcie zależne od ekspresji rekombinazy Cre (Figura 1A). Figura Strategia do wytwarzania odwrotnie immortalizowanej linii komórkowej i analizy immunofluorescencyjnej komórek EndoC-aH2. (A) Schematyczne przedstawienie wektora lentiwirusowego podatnego na sekrecję zastosowanego do wytworzenia endoC-P H2 odwrotnie unieśmiertelnionej linii komórkowej. (B) Analiza immunofluorescencyjna komórek EndoC-AH2. Komórki EndoC-P2 wybarwione pozytywnie na obecność insuliny (INS) i koekspresyjnego peptydu C (C-PEPT), CHGA, PDX1, NKX6.1, SV40 LT i Ki67. Komórki rzadko eksprymują somatostatynę (SST) i nie eksprymują glukagonu (GCG), amylazy (AMY), karboksypeptydazy-A (CPA) lub SOX9. Jądra barwiono barwnikiem fluorescencyjnym Hoechst 33342 (niebieski). Zdjęcia wszystkich plamek insuliny pobrano przy użyciu czasu akwizycji 700 ms w celu uzyskania nienasyconego sygnału. Skalowane pręty: 50 .m. W celu ekspresji SV40 LT lub hTERT pod kontrolą fragmentu 405-nt szczurzego promotora insuliny 2 skonstruowano możliwe do wykonania lentiwirusowe wektory. 9-tygodniowa ludzka trzustka płodowa została jednocześnie transdukowana obydwoma wektorami lentiwirusowymi i przeszczepiona pod torebkę nerkową myszy biorącej udział w SCID. W 6,5 miesiąca później z przeszczepionej tkanki wyłonił się insulinoma. Izoloma usunięto, zdysocjowano i dalej amplifikowano in vivo przez 3 kolejne rundy przeszczepu (dodatkowa postać 1A, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; doi: 10.1172 / JCI72674DS1). Część ostatecznego insulinoma analizowano za pomocą immunohistochemii. Komórki insuliny barwione dodatnio pod kątem insuliny i SV40 LT (Suplementowa Figura 1B). Są również barwione pozytywnie na Ki67, co nie miało miejsca w przypadku dorosłych trzustkowych ludzi. komórki. Komórki insulinoma wybarwiały się pozytywnie w stosunku do PDX1 i wykazywały ekspresję markera wewnątrzwydzielniczego chromograniny-A (CHGA), jak miało to miejsce w przypadku ludzkiego dorosłego trzustki. komórki
[podobne: przetoka zębowa, rosa canina, katalog oriflame 3 2015 ]