ul karmelicka 55 kraków

Eksperyment powtórzono 2 razy. Łącznie, nasze dane pokazują, że po ekspresji Cre, SV40 LT i hTERT można skutecznie wyciąć w linii komórkowej EndoC-aH2, prowadząc do zatrzymania proliferacji i wzmocnienia. funkcja komórki. Stabilność komórek EndoC-P H2. Przeanalizowaliśmy stabilność EndoC-aH2 w różnych pasażach na 3 ważnych cechach: (a) stabilność chromosomów; (b) zawartość i wydzielanie insuliny; i (c) zatrzymanie proliferacji po wycięciu nieśmiertelnych transgenów. Porównawcza hybrydyzacja genomowa (układ macierzy CGH) wskazała, że zgodnie z oczekiwaniami dla transformowanych SV40LT komórek, struktura chromosomowa komórek była nienormalna (Suplementalna Figura 5). Ale co najważniejsze, gdy przeprowadzono analizę macierzy CGH w 2 różnych pasażach, mianowicie p34 i p85, zaobserwowano dokładnie taki sam profil, co wskazuje, że pomimo, że struktura chromosomowa była nienormalna, struktura jest bardzo stabilna w czasie (Suplementalna Figura 5). Rzeczywiście, w ciągu całego roku w kulturze od p34 do p85, nie zaobserwowano żadnych zmian, co sugeruje, że ciągła ekspresja SV40LT przez EndoC-P H2 nie indukuje skumulowanych modyfikacji chromosomów. Zawartość insuliny zmierzono w pasażach 46, 59, 62 i 77. Przed wycięciem była stabilna (minimalna wartość 0,062 | ag / milion komórek przy pasażu 62, maksymalna wartość 0,090 | ag / milion komórek w pasażu 59) i systematycznie zwiększana po wycięciu (minimalna wartość wynosi 1,98 .g / milion komórek w pasażu 62, maksymalna wartość 2,75 .g / milion komórek w pasażu 59) (Tabela dodatkowa 1). Ponadto, w obecności IBMX, zaobserwowano reakcję glukozy we wszystkich testowanych pasażach i krotność indukcji wydzielania insuliny między 2,8 mM i 15 mM glukozy wahała się między 2,35 (pasaż 77) i 3,8 (pasaż 62) (Tabela dodatkowa 1). Wreszcie, niezależnie od liczby pasażowań, transdukcja z wektorem lentiwirusowym eksprymującym Cre zawsze powodowała zatrzymanie wzrostu. Inkorporacja BrdU testowana w pasażach 62, 105 i 120 była wysoka przed wycięciem (między 14% a 16% komórek pozytywnych) i drastycznie zmniejszona 21 dni po wycięciu (między 0,47% a 0,9% komórek dodatnich). Ponadto, w tych samych pasażach, ekspresja mRNA Ki67 mierzona za pomocą QPCR zmniejszyła się po wycięciu odpowiednio o 97%, 96% i 98%. Dyskusja W ciągu ostatnich 30 lat wiele badań miało na celu stworzenie funkcjonalnej ludzkiej trzustki. linie komórkowe wykazywały wyjątkowo niski odsetek powodzeń (13, 14). Co ciekawe, w 2011 roku my i inne niezależne laboratorium wygenerowaliśmy ludzki trzustkowy. linie komórkowe. . linie komórkowe opracowane przez laboratorium Flatt zostały wygenerowane przez elektro-fuzję świeżo wyizolowanego ludzkiego trzustki. komórki i nieśmiertelną ludzką linię komórkową nabłonka PANC-1 (15). Zawierały one ograniczoną ilość insuliny, ale wydzielanie insuliny zależało od poziomu glukozy. Rozwinęliśmy człowieka. linie komórkowe wykorzystujące podejście oparte na ukierunkowanej onkogenezie przez transdukcję ludzkich płodowych trzustek wektorami lentiwirusowymi, które eksprymują SV40 LT i hTERT pod kontrolą promotora insuliny. Jedna linia komórkowa, EndoC-AH1, opracowana w tym podejściu wyrażała dość duże ilości insuliny, a wydzielanie insuliny regulowano glukozą (10). Komórki EndoC-aH1 mają wiele podobieństw do pierwotnego człowieka. komórki. Jednakże, jako linia komórkowa, komórki EndoC-AH1 są w istocie komórkami proliferacyjnymi, podczas gdy pierwotny człowiek dorosły. komórki rozmnażają się wyjątkowo słabo. Aby zbliżyć się do prawdziwego człowieka. komórkę, opracowaliśmy w obecnej pracy warunkowo unieśmiertelnionej ludzkiej trzustki. linia komórkowa. Pierwszym krokiem było opracowanie nowych insulinoma z wykorzystaniem wektorów lentiwirusowych podlegających akceleracji, z których uzyskaliśmy nowego człowieka. linię komórkową, EndoC-P H2, który poddano szczegółowej analizie. Obecnie badania na ludziach. biologia komórki jest zależna od dostępu do preparatów ludzkich wysepek pozyskanych od dawców będących zwłokami
[podobne: reumatoidalne zapalenie stawów leczenie, przetoka okołoodbytnicza, oriflame katalog 8 2015 ]