żmuda oświęcim

Jądra barwiono barwnikiem fluorescencyjnym Hoechst 33342 (niebieski). Ustawienia obrazów konfokalnych wykorzystano do uzyskania nienasyconego sygnału insuliny dla wyciętych komórek EndoC-aH2. Te same ustawienia zostały użyte do wygenerowania obrazu insuliny dla nieodcinkowanych komórek EndoC-aH2. Skalowane pręty: 50 .m. (C) Ekspresję Ki67 analizowano za pomocą RT-QPCR. Wyniki przedstawiono jako znormalizowane dla cyklofiliny i względem kontrolnych niepoddanych transdukcji komórek EndoC-aH2. Wyniki są wyświetlane jako średnie. SD 3 niezależnych preparatów RNA. (RE). Inkorporowanie BrdU przez niewybrane i wycięte komórki EndoC-aH2 po 1-godzinnym impulsie BrdU. Wyniki przedstawiono jako średni procent. SD. Analiza szlaku intencjonalności wykazała znaczące różnice pomiędzy komórkami niewybieralnymi i wyciętymi dla 16 przypisów funkcji pomysłowości związanych z cyklem komórkowym z wysoce znaczącymi wartościami P (między 2,66 x 10 20 i 1,54 x 10 3) (tabela 1). Konkretnie, ekspresja wielu genów pozytywnie związanych z proliferacją komórek zmniejszyła się po delecji transgenów. Dotyczy to na przykład członków rodziny z podziałem komórek (CDC), członków rodziny kinezyn (KIF), kinaz zależnych od cyklin, takich jak CDK1, cykliny (CCN), czynników transkrypcyjnych E2F i dodatkowych genów związanych z cyklem komórkowym, takich jak MKI67 i FOXM1 (Figura 3). Podobnie, ekspresja zależnego od cyklin inhibitora kinazy 1A (CDKN1A), który jest ujemnie połączony z cyklem komórkowym, silnie wzrosła po delecji transgenu (Figura 3). Co ciekawe, w porównaniu z wyspą niewyrównaną w porównaniu do wysepek uzyskano te same kategorie pomysłowości, które wykazywały podobnie wysokie wartości P (tab. 1). To pokazuje, że niewybrane komórki są tak odległe od wysepek, ponieważ są wycinanymi komórkami w odniesieniu do funkcji cyklu komórkowego. Co ważniejsze, gdy wycięte komórki porównano z wysepkami, wcześniej zaobserwowane różnice nie były znaczące (P> 0,05) dla 11 z 16 opisów funkcji pomysłowości. Chociaż 5 opisów funkcyjnych funkcji wciąż było znacząco różnych, ich odpowiadające wartości P były zawsze znacznie mniej znaczące (tj. Wartości dla różnych faz P wynosiły od 10. 14 do 10. 6) (Tabela 1). Na koniec, analizy porównawcze genów pokrewnych dla cyklu komórkowego przeprowadzone za pomocą ilościowego PCR (QPCR) i analizy Western blot wykazały, że ekspresja CDK1, CCNE2 i CCNB2 zmniejszyła się po wycięciu, aby osiągnąć poziomy podobne do tych znajdujących się w wysepkach (Suplementowa Figura 3 i Dodatkowa figura 4). Co ciekawe, CCND1 znaleziono nieobecny w EndoC-AH2, ale wyrażano w preparatach komórek wysp trzustkowych (Suplementowa Figura 4). Figura 3: Ekspresja immortalizujących się transgenów moduluje ekspresję genów związanych z cyklem komórkowym. Porównania mapy ciepła ekspresji zestawu genów związanych z cyklem komórkowym w nieobciążonych komórkach EndoC-P2 i wyciętych komórkach względem ludzkich wysepek. Mapa ciepła pokazuje intensywność rejestrowania w 3 próbnych zestawach nieobciętych lub wyciętych komórek EndoC-H2 i ludzkich wysepek (42). W przypadku genów reprezentowanych przez kilka zestawów sond zastosowano zestaw sond z najwyższą zmianą złożenia. Lista genów jest uporządkowana od niskiej do wysokiej ekspresji względem próbki wysepek ludzkich. Listy genów zostały wygenerowane przy użyciu opublikowanych danych transkryptomicznych (43), danych literaturowych i instrukcji obsługi. Tabela Analiza szlaku intencjonalności Wzorzec ekspresji genów w EndoC-P H2. Następnie przeprowadzono porównawczą analizę transkryptomiczną w celu określenia profilu ekspresji EndoC-P H2 przed i po wycięciu transgenu w porównaniu z przygotowaniem ludzkich wysepek i ludzką linią komórkową SKPC (12). Ujawniło to, że niewybrane komórki EndoC-aH2 były wysoko wzbogacone w ekspresję dużej liczby. specyficzne dla komórek geny (Figura 4A). Podobne porównania wskazywały na bardzo niski poziom ekspresji genów zewnątrzwydzielniczych w niewyspecjalizowanych komórkach EndoC-aH2 (Figura 4B)
[patrz też: polipektomia, oriflame katalog 17 2014, rosa canina ]